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利用修饰的随机引物构建非洲爪蟾酵母双杂交定向cDNA文库
非洲爪蟾 酵母双杂交 随机引物 定向cDNA文库
2009/6/23
描述了一种新的构建cDNA文库的方法，其中用来合成cDNA第一链的随机引物5′-端被加上碱基d（AC），在cDNA双链合成后所添加的连接头的末端含有碱基d（GTCG）。在cDNA双链3′-端，连接子连接上后会形成一个完整的SalI酶切位点d（GTCGAC），而在5′-端几乎不会形成SalI位点。在SalI酶切后利用形成的3′-粘性末端与5′-EcoRI粘性末端一起将cDNA双链定向导入线性化的质粒...
本项研究以雌性草鱼肠道为实验材料，采用非均一化的Oligo—dT引物定向克隆技术构建了草鱼肠道组织的
cDNA文库，对文库质量的分析结果表明：cDNA文库的库容量至少为2．3×lo5，重组率达95％ ，平均插入片断长度
大于1000bp。挑取cDNA克隆进行5’端测序，总共进行了1571个成功反应，其中l4ll条ESTs长度大于100bp，初步
拼接得到939个单基因簇(Unigene)，其...
大海马垂体糖蛋白激素α亚基的cDNA克隆和序列分析
大海马 糖蛋白激素a亚基 eDNA克隆
2009/6/3
大海马(Hippocampus kuda Bleeker)隶属鱼纲海龙目，是一种名贵的海产中药材，也是重要的海洋保护鱼类。我
们通过快速扩增eDNA末端(rapid amplification of eDNA ends，RACE)的方法，首次从大海马的垂体总RNA中扩增出其
垂体糖蛋白激素a亚基(pituitary glyeoprotein hormone a subunit，PGH a)全长...
团头鲂促性腺激素β亚基cDNA的克隆和序列分析
RT—PCR RACE 克隆 团头鲂 促性腺激素B亚基cDNA
2009/6/2
本研究利用RT—PCR和RACE克隆了团头鲂(Megalobrama amblycephala)脑下垂体中两种促性腺激素B亚基
(GtH Ip和GtH IIp)cDNA序列，并对其进行了结构和系统进化分析。团头鲂GtH Ip亚基cDNA全长567碱基对
(bp)，5’端非翻译区26bp；3’端非翻译区148bp；开放阅读框(ORF)393bp，其编码含有130个氨基酸的蛋白质，包括
由108...
摘要 本文以新鲜猪胰脏为材料,采用异硫氰酸胍法和寡聚(dT)-纤维素亲和层析法,提取了Poly(A)~+RNA,经麦胚无细胞体系鉴定其体外翻译活性,~3H-Leu参入量为空白对照的5倍。参照Gubler和Hoffman等人的方法,以此poly(A~+)RNA为模板,合成总cDNA,并采用多聚物加尾法,与pUC19质粒重组,转化入感受态E.coliJM107,进行分子克隆,其转化率为3.6×10~4...
摘要 h IL- 2基因和 m IFN- γ基因经 IRES连接后克隆入腺相关病毒质粒表达载体 p AC中 ,构建得双基因质粒表达载体 p AC- FRI.体外经阳离子脂质体 Dosper介导转染小鼠肝癌细胞 MM45T.Li,Northern印迹及生物活性检测分别从 RNA水平和蛋白质水平证明了 2个基因的表达 .直接瘤内注射 Dosper- DNA复合物后 ,与对照组 ( Lac Z)相比 ,...
人巨细胞病毒IE基因调节子特异DNA结合蛋白cDNA的克隆和鉴定
HCMV-IE基因 DNA结合蛋白 cDNA表达库
2007/12/24
摘要 本文利用人巨细胞病毒(HCMV)IE基因调节子中特异DNA片段作为探针,自人Hela细胞cDNA表达库中筛选并分离出两个编码能与该探针结合的DNA结合蛋白cDNA克隆(DJ-1和EH-2)。其中EH-2编码的蛋白具有明显的DNA结合序列特异性。比较DJ-1和EH-2克隆在HCMV戚染不容性和可容性畸胎瘤细胞中mRNA表达水平,未见明显差异。DJ-1和EH-2克隆可能涉及IE基因表达调控过程。...
人TIMP-1 cDNA克隆、真核表达载体构建及在COS-7细胞中的表达
TIMP-1 克隆 细胞转染COS-7细胞
2007/12/24
摘要 根据 Gen Bank中 TIMP- 1基因的碱基序列 ,用 RT- PCR方法从人的正常肾组织中克隆出包含信号肽在内的 TIMP- 1全长 c DNA序列 .采用 T- A克隆的方法将之插入 p CRR2 .1中间载体 ,DNA测序证实该片段序列与文献报告的完全一致 .利用亚克隆的方法将 TIMP- 1 c DNA片段克隆到 pc DNA3载体上 ,构建出 pc DNA3/ TIMP- 1...
辐射诱导转录子RIGb cDNA对HeLa细胞增殖的抑制作用
辐射诱导基因 基因表达 细胞周期 细胞增殖
2007/12/20
摘要 核酸序列同源性分析和RT -PCR确定辐射诱导转录子RIGb是染色质重构基因CHD6表达的一个剪接转录子 .Northern杂交结果表明 ,0 . 5Gyγ射线诱导RIGbmRNA表达增加 ,但 4Gy大剂量照射对其表达无明显的影响 .正常成人组织Northern杂交结果显示 ,RIGb基因在心脏、肝脏和睾丸中有高表达 .细胞生长曲线分析结果表明 ,转染和稳定表达RIGb的人宫颈癌细胞 (H...
摘要 为提高hVEGFcDNA在心肌中的表达 ,降低在其它组织中表达可能产生的不良反应 ,用PCR法得到人磷酸肌酸激酶 (MCK)增强子和CMV核心启动子 .利用克隆技术构建了含双拷贝MCK增强子 (m)和人巨细胞病毒 (CMV)核心启动子 (c)的嵌合启动子 (mmc) ,构建真核表达质粒pK3 mmcLacZ ,制备受mmc嵌合启动子调控的重组腺病毒Ad mmcVEGF .经X gal染色、β...
摘要 以氯高铁血红素 (hemin)诱导K5 6 2分化作为体外红细胞分化模型 ,结合cDNA大规模测序、生物信息学分析、基因芯片杂交和NorthernBlot分析等技术 ,筛选红细胞分化相关的新基因 .首先利用大规模测序技术从人胚肾cDNA文库中随机挑选克隆测得 192个EST(expressedsequencetags)片段 ,经在线生物信息学分析 ,得到 79个代表新基因的未知EST片段 ,...
胶质细胞源神经营养因子cDNA全序列的克隆及其生物学功能的研究
胶质细胞源神经营养因子 逆转录聚合酶链反应 转染 坐骨神经 损伤 再生
2007/12/18
摘要 为了研究ＧＤＮＦ在神经系统中的生物学功能，通过ＲＴ－ＰＣＲ方法从大鼠睾丸总ＲＮＡ中扩增出ＧＤＮＦｃＤＮＡ全序列，序列分析表明与ＧｅｎＢａｎｋ中的顺序完全相同．将ＧＤＮＦｃＤＮＡ以非融合方式连接在真核表达载体ｐＥＧＦＰ－ＮⅠ的绿色荧光蛋白的上游，在ＣＭＶ启动子控制下表达．通过绿色荧光蛋白报告基因的表达表明ＧＤＮＦｃＤＮＡ能在真核细胞ＨｅＬａ中很好表达．采用裸ＤＮＡ转染方法研究ＧＤＮＦ对损伤的坐...
摘要 ＯＳＭ是一种对黑色素瘤细胞显示抑制作用的细胞因子．为进行ＯＳＭ针对黑色素瘤的基因－放射治疗研究，构建了小鼠Ｅｇｒ－１基因调控序列引导入ＯＳＭｃＤＮＡ真核表达质粒（ｐＥＯ），ｐＥＯ质粒转染小鼠Ｂ－１６黑色素瘤细胞，经Ｇ４１８和抗人ＯＳＭ抗体的筛选，获得了稳定表达ＯＳＭ的克隆细胞（ｐＥＯ－１细胞），ＯＳＭ表达量可达５．９７ｎｇ每１０５细胞天，分子量为３２ｋＤ．ｐＥＯ－１细胞用一定浓度Ｈ２Ｏ２处理...
摘要 利用ＰＣＲ技术，从正常人胎肝染色体ＤＮＡ中克隆到长度为１５７２ｂｐ的人促红细胞生成素（ＥＰＯ）基因组基因片段，它包含除第一个外显子和第一个内含子外所有外显子及内含子。再人工合成１３ｂｐ外显子１的编码区，并与１５７２ｂｐ片段拼接，从而得到除第一个内含子的人促红细胞生成素基因组基因。将克隆得到的ＥＰＯ基因插入载体ｐＳＶ２－ｄｈｆｒ得到ｐＳＶ２－ＥＰＯ表达载体，转染ＣＯＳ－７细胞后获得高效表达。利...
同型半胱氨酸/半胱氨酸诱导血管平滑肌细胞中的新cDNA
同型半胱氨酸／半胱氨酸 新ｃＤＮＡ 心血管疾病
2007/12/17
摘要 同型半胱氨酸／半胱氨酸是体内的含硫氨基酸，近年来提出它们可以诱导血管平滑肌细胞的增殖，是心血管病的一个新的独立的危险因子．但其机制尚不了解，本研究目的在于克隆同型半胱氨酸／半胱氨酸诱导的新基因．应用差异显示即ＲＮＡｍａｐｐｉｎｇ的方法，从半胱氨酸诱导的大鼠血管平滑肌细胞中，寻找有差异的条带，克隆新的ｃＤＮＡ．结果分离出７种上调和４种下调ｃＤＮＡ，并且发现其中有４个是至今尚未发现的新的ｃＤＮＡ...