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上海市农业科学院作物育种栽培研究所水稻中心在农业和生物科学领域主流期刊Ricescience(二区，IF=3.162)刊发了题为“A New PCR/LDR-Based Multiplex Functional MolecularMarker for Marker-Assisted Breeding in Rice”的研究论文。
茉莉花实时荧光定量PCR内参基因的筛选与验证
茉莉花 qRT-PCR 内参基因 表达稳定性
2021/4/1
为筛选适合茉莉花的内参基因，以5种组织（根、茎、嫩叶、成熟叶、花）和4个发育阶段的花（幼蕾期、膨大花蕾期、最长花蕾期和初绽期）为试验材料，选择较常见的8个候选内参基因进行引物特异性分析，结果显示，8个内参基因均扩增出单一条带，溶解曲线均只有明显的单一峰。采用qRT-PCR技术分析8个内参基因在不同样品中的表达量，结果显示，内参基因在不同样品中的表达量存在差异，各基因在花中的表达量均显著低于其他样品...
多重PCR检测耐除草剂转基因作物
转基因作物 除草剂抗性基因 多重PCR 筛选检测
2020/3/19
为建立耐除草剂转基因作物的高通量检测方法,本试验以目前生产上广泛应用的5种除草剂抗性基因dmo、pat、CP4EPSPS、bar和aad1为靶标进行多重PCR(MPCR)研究。通过引物适用性测试、反应体系中的不同引物浓度和反应程序中的退火温度测试、灵敏度和特异性验证等,建立了能同时检测5种除草剂抗性基因的MPCR检测方法。结果表明,当dmo、pat、CP4EPSPS、bar、aad1基因的检测引物...
DNA条形码与实时荧光定量PCR技术在铁皮石斛鉴定中的应用
铁皮石斛 多重荧光PCR 探针 鉴定
2020/6/17
为建立铁皮石斛准确、高效的鉴定体系,本研究以101份石斛属和蝴蝶兰属植物样品为试验材料,通过对比ITS、psbA-trnH、matK及rbcL基因在石斛属植物中的鉴定能力,筛选出ITS作为本研究最理想的DNA条形码。以ITS序列作为靶基因,设计铁皮石斛特异引物和特异探针,以及石斛属通用引物和探针,利用实时荧光定量PCR(TaqMan)技术,建立铁皮石斛多重实时荧光PCR检测新体系,通过特异性、灵敏...
冬瓜实时荧光定量PCR内参基因的筛选与评价
冬瓜 内参基因 非生物胁迫
2020/3/19
为筛选适合冬瓜稳定表达的内参基因,以黑皮冬瓜低温、高温、干旱胁迫处理不同时间的叶片和正常处理不同组织为试验材料,利用RT-qPCR技术,结合GeNorm、NormFinder和BestKeeper软件评价7个候选内参基因(28SrRNA、UBQ、RP Ⅱ、GAPDH、EF-1α、UBC21和TUA)稳定性。结果表明,7个候选内参基因在不同组织和不同胁迫处理下表达丰度及稳定性存在差异; EF-1α在...
西南鸢尾花色变异实时定量PCR内参基因的筛选与验证
西南鸢尾 花色变异 实时定量PCR 内参基因
2020/3/9
为筛选适用于不同花色西南鸢尾花色合成途径相关基因表达分析的内参基因,本研究根据西南鸢尾及其白花变型白花西南鸢尾花蕾组织的转录组测序数据,筛选了6个常用内参基因(ɑ-TUB、β-TUB、AQP、ACT、GAPDH、UBQ),同时以百合18S做为对照内参基因,在西南鸢尾及其白花变型白花西南鸢尾的花蕾组织中,分别通过反转录PCR(RT-PCR)初筛和RT-qPCR检测表达量,并利用geNorm、Norm...
利用转移PCR技术构建玉米SnRK2基因家族表达载体
表达载体 玉米 蔗糖非酵解型蛋白激酶 转移PCR(T-PCR)
2020/3/10
在构建玉米蔗糖非酵解型蛋白激酶2(SnRK2)基因家族表达载体的过程中,因为表达载体可供选择的多克隆位点较少,且有些还与目的基因同源,所以采用转移PCR(T-PCR)扩增技术替代通常的酶切连接方法。为避免错误连接或未连接的第一轮T-PCR中间产物对退火温度不同的第二轮扩增循环产生干扰,本研究对T-PCR接头引物3'-端和5'-端的两段序列及其退火温度、引物、供体质粒和目标质粒模板的浓度,特别是温度...
油菜抗咪唑啉酮类除草剂基因BnALS1R是从抗性突变体M9中克隆获得，抗性基因BnALS1R与野生型基因BnALS1存在1处SNP，即乙酰乳酸合酶第638位丝氨酸残基被天冬酰胺酸替代。为获得油菜抗除草剂基因BnALS1R的分子标记，根据该处点突变，结合获得的BnALS3与BnALS1序列，开发30条等位基因特异PCR (allele-specific PCR，AS-PCR)引物，采用筛选出的3条A...
易错PCR研究进展及应用
易错PCR 随机诱变 研究进展
2013/9/4
易错PCR是目前最简单、有效的一种基因体外随机诱变技术,是农业、工业、生物制药等领域获得优异基因的重要手段。本文综述了易错PCR的基本原理、方法、发展历程,以及该技术的最新研究成果、成功应用领域,并提出了目前存在的问题和可能解决途径。
猴头菌DNA提取条件及SRAP-PCR体系的优化
猴头菌 SDS-CTAB SRAP-PCR
2012/2/14
以猴头菌(Hericium erinaceus)菌丝体为试验材料,建立最优的DNA提取条件和SRAP－PCR扩增体系。结果表明：改进的SDS－CTAB法能较好地满足猴头菌属DNA的提取,优化后SRAP-ＰCR反应体系经过验证,该体系可用于猴头菌的遗传多样性分析和品种鉴定。
采用正交设计和单因素试验相结合的方法,对铁皮石斛的SCoT-PCR反应中5个因素(DNA 模板、Mg2+、dNTPs、Taq 酶和引物)进行优化试验。建立了适合铁皮石斛既稳定且多态性高的SCoT-PCR的最佳反应体:20μl PCR反应体系中含有1×Buffer、30ng DNA 模板、2.5mmol·L-1Mg2+、0.15mmol·L-1 dNTPs、1.5U Taq DNA聚合酶和0.4μm...
棉花多重PCR技术及其对杂交棉纯度鉴定的初步研究
棉花 SSR 多重PCR 纯度检测
2013/8/6
选取在湘杂棉系列品种间表现出多态性稳定的部分SSR引物，基于其扩增片段大小的不同来组合引物，进行棉花多重PCR扩增。结果表明，在与单一PCR扩增相同反应条件下，仅根据扩增片段大小不同的原则，可使80%的两重PCR组合获得正常扩增。利用两重PCR组合正常扩增的引物进行三重、四重PCR反应时，均可获得正常扩增的产物，在此基础上提出棉花上简化的多重PCR优化程序。并将多重PCR技术应用于杂交棉种子纯度检...
大豆花叶病毒的组织印迹与RT-PCR检测
大豆花叶病毒检测 组织印迹 RT-PCR
2015/9/29
用改进的组织印迹方法批量检测黄淮地区69份SMV样品，结果显示42个标样呈现非常清晰的蓝紫色阳性反应，26个标样显色较弱而无法确证，1个标样呈阴性反应。进一步对图片进行600 dpi扫描并放大200倍进行分析，发现26个显色弱的标样中有25个呈阳性反应，1个标样显色很弱仍无法确证，使得检出率提高了37%。利用RT-PCR程序对随机选取的8个样品进行验证，发现纯化与未纯化的RNA模板均能得到较为清晰...
采用实时荧光定量PCR方法检测了不同感光大豆品种的CO(CONSTANS) 基因在不同光照条件下的mRNA水平变化。结果表明：早熟品种东农49和晚熟品种东农42各自在短日照(8h/16h 光/暗)下会比长日照(16 h/8 h 光/暗)下表达有所增强，同时东农49中CO基因的表达要高于东农42，它们的表达峰值均出现在光暗交界处。东农42由长日照或短日照移入完全光或完全暗条件时，暗下CO基因的表达量...