搜索结果: 1-15 共查到“基础医学 cDNA”相关记录81条 . 查询时间(0.265 秒)
森林革蜱半饱血雄蜱抑制消减杂交cDNA文库的构建及差异基因的分析
抑制消减杂交 cDNA文库 差异基因
2014/9/25
构建森林革蜱（Dermacentor silvarum）半饱血雄蜱抑制消减杂交cDNA文库，分析差异基因。 方法 以森林革蜱半饱血雄蜱为实验组（tester），未吸血雄蜱为对照组（driver），分别提取总RNA，SMARTER PCR合成双链cDNA，Rsa Ⅰ酶切后连接接头并进行抑制消减杂交。巢式PCR扩增杂交产物，经柱纯化后连接至PMD?鄄18T中，转化大肠埃希菌DH5α感受态细胞，进行蓝白...
金黄色葡萄球菌N315 T7噬菌体cDNA展示文库的构建
噬菌体展示 cDNA文库 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 N315
2014/7/30
构建MRSA N315菌株的T7噬菌体cDNA展示文库，以筛选和鉴定影响N315 ccr基因表达的调节因子。 方法 采用Tripure试剂提取N315总RNA，逆转录合成双链cDNA，经末端修平、接头连接、酶切后柱洗脱等处理后，连接T7Select 10-3载体，体外包装扩增获得N315 T7噬菌体cDNA展示文库；通过双层平板实验鉴定所建原始文库及扩增文库的库容；PCR鉴...
人前蛋白转化酶枯草溶菌素9的cDNA克隆和表达及多克隆抗体的制备
人前蛋白 酶枯草溶菌素9 cDNA克隆 多克隆抗体
2013/9/16
构建人前蛋白转化酶枯草溶菌素9(pcsk9)的原核表达载体并诱导其表达, 制备其蛋白的多克隆抗体。方法 聚合酶链式反应扩增人工合成的pcsk9 cDNA序列; 扩增产物经TA克隆、双酶切、连接, 构建pET-28b-pcsk9表达载体; 将重组质粒转化入大肠杆菌表达菌BL21（DE3）的感受态细胞中, 诱导表达; 用纯化检测过的目的蛋白免疫新西兰兔, 最后采集全血收集血清, 获得多克隆抗体, 并对...
关中黑猪IL-5 cDNA的克隆表达与多克隆抗体制备
关中黑猪IL-5 cDNA 克隆表达 多克隆 抗体制备
2013/9/16
克隆关中黑猪IL-5 cDNA, 构建该基因的不同表达质粒, 获得表达的IL-5并制备其多克隆抗体。方法 提取佛波酯（PHA）刺激的关中黑猪外周血单个核细胞（PBMC）总RNA, RT-PCR克隆猪IL-5基因（sIL-5）, 鉴定后将sIL-5基因分别克隆到pQE30、pET-32a和pEGFP-N1中, 构建重组表达质粒pQE-sIL-5和pET-sIL-5及pEGFP-sIL-5, 将pEG...
为揭示猪Opn4基因的结构并研究其在猪视网膜中昼夜表达差异与生长各阶段表达规律, 文章克隆了猪Opn4基因全长CDS区序列, 定量检测了Opn4基因在猪视网膜中昼夜的表达量以及其在不同生长阶段的表达量。结果表明, Opn4基因编码区序列为1 437 bp, 编码478个氨基酸, 分子式为C2398H3705N623O651S23; Opn4基因在白昼的表达量极显著高于夜晚(P<0.01); Opn...
田鼠巴贝虫cDNA文库构建与免疫筛选
田鼠巴贝虫 cDNA文库 免疫筛选
2013/11/21
目的 构建田鼠巴贝虫cDNA文库，从中筛选免疫诊断候选抗原。 方法 用田鼠巴贝虫感染BALB/c小鼠，约7 d后待虫血密度达到70%时取血，提取虫体总RNA，经mRNA 纯化试剂盒纯化后，构建田鼠巴贝虫的cDNA文库。用田鼠巴贝虫感染阳性小鼠血清筛选cDNA文库，获得阳性克隆，PCR鉴定阳性克隆插入片段大小，测序并进行同源性分析。 结果 所构建的田鼠巴贝虫cDNA文库的滴度为5.2 × 105噬菌...
细粒棘球蚴cDNA文库的构建和免疫筛选
细粒棘球蚴 原头节 cDNA文库 免疫筛选
2013/11/25
目的构建细粒棘球蚴原头节的λ ZAP Ⅱ cDNA文库，并对构建的文库进行免疫筛选。 方法采集感染细粒棘球蚴的绵羊育囊中的原头节，用Trizol试剂抽提总RNA，用mRNA纯化试剂盒纯化mRNA作为模板合成cDNA，并对其进行末端平端化、EcoR Ⅰ接头连接和磷酸化及Xho Ⅰ酶切，然后应用Sepharose CL2B分离柱对其进行分级分离，收集大于500 bp的cDNA片段，使用Gigapac...
在已知中国美利奴羊MHC(Major histocompatibility complex)区段BAC(Bacterial artificial chromosome)克隆序列信息和预测的基因注释前提下, 用位于中国美利奴羊基因组BAC文库MHC区段的6个BAC克隆酶切片段为探针, 以噬菌斑原位杂交筛选法筛选中国美利奴羊混合组织cDNA文库(库库杂交), 对分离到的cDNA阳性克隆进行全序列测定,...
寻找可用于日本血吸虫病诊断或疗效考核的抗原分子。 方法 在安徽省安庆市某现场，采集经粪检（Kato-Katz法，2送6检）日本血吸虫卵阳性的10份患者血样，患者年龄13～64岁，EPG为4～172；并收集该10例患者经吡喹酮（60 mg/kg×2 d）治疗6个月后的血样，将吡喹酮治疗前和治疗后的血清各10份分别混合，分别筛选虫卵cDNA文库，将所获阳性克隆分类，测定阳性克隆插入片段的DNA序列，经...
广州管圆线虫cDNA文库基因筛选的研究进展
广州管圆线虫 cDNA文库 筛选
2013/11/27
cDNA文库因不含内含子而便于克隆和大量扩增，利用多种筛选方法并结合生物信息学软件获得阳性克隆，对于从分子水平上深入研究广州管圆线虫病的致病机制及诊断方法具有重要意义。该文综述了广州管圆线虫各期cDNA文库特异基因筛选的研究进展。
克隆家蝇抗真菌肽-1(MAF-1）的cDNA序列并对其编码的蛋白序列进行生物信息学分析。 方法 根据MAF-1的N端30个氨基酸序列设计简并引物，采用RACE法和巢式PCR技术克隆MAF-1的3′端和5′端cDNA序列，获得MAF-1的cDNA序列和氨基酸序列。根据所得MAF-1成熟肽部分的cDNA序列设计引物进行RT-PCR，对序列进行验证并运用生物信息学软件进行分析。 结果 MAF-1的3...
肝脏脂肪酸结合蛋白(L-FABP)与脂肪运输及沉积关系密切。文章以8周龄丝羽乌鸡(CC)、农大褐蛋鸡(DD) 及其正反杂交组合鸡(CD和DC)为试验材料, 利用mRNA差异显示技术, 在肝脏组织中获得一条阳性差异表达片段。通过片段回收、测序及序列比对发现, 该差异表达片段为鸡L-FABP基因的全长cDNA编码序列(NCBI登录号: AY321365)。Northern杂交和半定量RT-PCR结果显...
构建间日疟原虫红内期全长cDNA文库
间日疟原虫 红内期 cDNA文库
2010/8/24
采集未经治疗的间日疟患者血样，滤去白细胞后浓集含虫红细胞，提取总RNA，用SMART cDNA文库构建试剂盒构建间日疟原虫红内期全长cDNA文库。测定cDNA文库库容，蓝白斑筛选，计算重组率。随机挑选48个菌落，用M13+／－引物进行PCR鉴定插入片段大小。构建的间日疟原虫红内期全长cDNA文库原始库容为1.14×106，重组率为97.2%，重组子插入cDNA片段大小为900～2 500 bp。
目的: 筛选HCV非结构蛋白2(NS2)反式调节蛋白(NS2TP)的结合蛋白，探讨HCV的致病机制及新蛋白NS2TP的生物学功能. 方法: 应用酵母双杂交系统3，将PCR法扩增的NS2TP基因连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒，转化单倍体酵母细胞AH109并在其内表达，然后与转化了人白细胞文库质粒pACT2的单倍体酵母细胞Y187进行配合，在营养缺陷型培养基和X-alpha-半乳糖(X-...
目的: 用酵母双杂交技术筛选白细胞中与NSA5TP1结合蛋白的编码基因.方法: 用多聚酶链反应(PCR)法扩增NS5ATP1基因，连接入酵母表达载体pGBKT-7中构建诱饵质粒，转化酵母细胞AH109并在其内表达，然后与转化了人白细胞文库质粒的酵母细胞Y187进行配合，在营养缺陷型培养基上进行双重筛选阳性菌落，增菌后提出质粒，转化入大肠杆菌(DH5alpha)，提出质粒并测序，进行生物信息学分析....